細胞爬片又名爬片,就是讓玻片浸在細胞培養(yǎng)基內(nèi),細胞在玻片上生長,主要用于組織學,免疫組織hua學,冰凍切片,細胞涂片,原位雜交等,細胞爬片是根據(jù)實驗研究的需要,使貼壁細胞在一定的固相表面(如蓋玻片、載玻片)上貼壁生長而獲得的一種體外細胞實驗材料。
我們在做免疫熒光(IF),激光共聚焦(Confocal),凋亡檢測(TUNEL)時,免不了要制備細胞爬片,爬片質(zhì)量*決定了后拍照的質(zhì)量以及實驗數(shù)據(jù)的性。
在醫(yī)學生物研究中,免疫熒光檢測等需用到細胞爬片。現(xiàn)有的細胞爬片多采用表面平整、光滑的透明玻璃玻片。但在做免疫熒光檢測時,為了節(jié)約抗體,需免疫組化筆在爬片上進行范圍的圈定,將抗體加入劃定區(qū)域,免疫組化筆中的疏水成分阻滯抗體溢出所圈定的范圍,從而達到節(jié)約抗體的目的。
但在實際使用過程中,會有大量免疫組化筆的成分混入目標范圍內(nèi),且線條粗大,造成樣品數(shù)量減少,同時混入目標范圍內(nèi)的免疫組化筆的成分容易造成背景噪聲及雜質(zhì)影響免疫熒光的結(jié)果,嚴重影響實驗結(jié)果的準確。
爬片的準備:
1、爬片可用一般的蓋玻片,也可用爬片;
2、應用蓋玻片,可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小,以備置于6孔板、12孔板或24孔板;
3、將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過夜,第二天先用自來水沖洗20遍,再用三蒸水沖洗3遍(個人認為主要目的是沖洗干凈就可以了),放在飯盒或者培養(yǎng)皿(一定是玻璃的哦,要不然就……)中烘干后進行高壓消毒。
培養(yǎng)板的準備:
1、泡酸過夜
2、沖洗,烘干(1、2步驟與前大致相同)
3、放入超凈工作臺用紫外線照1~2小時就可以用了(在照之前可以將爬片一并放入,若細胞貼壁能力不強,可經(jīng)多聚賴氨酸浸片后放入。貼壁能力強的話,就可以省略了,進行紫外線消毒)
注:此步自己的經(jīng)驗是爬片可以先浸入消毒后的PBS內(nèi),緊接著放入培養(yǎng)板內(nèi)。目的:浸過PBS的爬片依靠表面的液體,可以用培養(yǎng)板孔底貼和緊密,以利于細胞長到爬片上。